DoctorKorea

혈혼 예비검사에서 양성으로 반응하는 경우 혈흔본시험을 시행하게 된다.

(1) Hemochromogen 결정시험

원리 : 혈액은 알칼리성 상태에서 pyridine에 의해서 hemoglobin이 용출 되고 이것이 포도당에 의하여 환원되어 환원 hematin, 즉 hemochromogen의 형성된다.

( hemochromogen 시약)
포도당 3 ml
pyridine 3ml
10% 가성나트륨 3ml
증류수 7ml 또는 30 % 포도당 10 ml
10% 가성나트륨 3ml
pyridine 3ml

검체의 일부를 slide glass 위에 놓고, 여기에 시약을 가해서 약한 화염으로 가열한다.

혈흔이면 선적색의 크리스탈 모양 또는 바늘모양의 결정이 나타난다.

이것이 hemochromogen의 결정이다.

이 시험은 예민도가 낮다.

여러 조건에 좌우되고 충분한 양이 없으면 결정이 형성되기 어렵다

(2) 형광시험 Hematoporphyrin test

Hb유도체에 있는 Hematoporphyrin이 형광을 발한다

1880년 Hoppe-Seyler에 의해서 발견

법의학적 혈흔검사에 사용

① 원법
소량의 검체를 백색시험판에 취하고 먼저 농황산을 1∼2방울 가하고 암실에서 자외선을 조사하면 적등색의 형광을 발한다. (산성 hematoporphyrin)

그 위에 황산을 여과지로 잘 빨아내고, 1∼2방울의 물을 가하고 다시 빨아내고, 거듭 1∼2방울의 ammonia를 가하고 자외선을 조사하면 농적색의 형광을 발한다(알칼리성 hematoporphyrin).

② 변법
예민도 : 산성법으로 적등색의 형광을 나타내는 것은 2∼4천 배이고, 그 이상 엷은 혈흔에서는 황등색으로부터 황색 빛깔이 된다. 알칼리법으로서도 붉은 색의 형광을 나타내는 것은 2∼4천 배이다.

2. 혈흔의 인수혈감별 검사

(1) 항인혈청침강소법

① 항인혈청
인혈청을 집토끼에 면역한 것

② 항원
의문의 혈흔의 생리적식염수 침출액

㉠ 항인혈청 + 피검혈흔침출액 ® 반응 +
㉡ 항인혈청 + 기지인혈흔침출액 ® 반응 +
㉢ 항인혈청 + 생리적식염수 ® 반응 -
㉣ 항인혈청 + 동물혈흔침출액 ® 반응 -
㉤ 정상토끼혈청 + 피검혈흔침출액 ® 반응-
이상의 결과가 되면, 의문의 혈흔은 사람혈흔이라 단정할 수 있다.

그러나 이 항인혈청침강은 종속특이성은 높으나, 장기특이성이 낮다.

사람 혈액이 아니라도 사람 체액이나, 분비물에 의하여도 반응하기 때문에 주의를 요한다.

(2) Fribrin Plate 법

사람 혈청은 다른 동물 혈성에 비하여 다량의 proactivator를 함유

fibrin plate 를 작성하여 혈흔침출액과 streptokinase를 떨어뜨리고, 섬유소 용해현상의 유무로 인혈 여부를 판정한다.

3. 혈흔의 혈형검사

혈흔의 혈형검사는 ABO식 혈형에 대해 시행

ABO식 혈형은 혈구 표면의 형특이물질 또는 혈청 중의 혈구응집소에 의하여 판정

응집소는 빨리 파괴되기 때문에 대체로 혈흔 중의 형물질에 의하여 혈형을 결정

혈형물질의 결정기는 당질이기 때문에 악조건에 보존되지 않는 한 장기간 경과 후에도 증명이 가능하다.

항혈청은 형물질 이외에 다른 물질에 의하여 비특이적으로 흡착되는 경우가 있으므로 대조시험을 반드시 하여야 한다.

ABO식 이외의 다른 혈형도 혈흔에서 판정이 가능하나 많은 혈흔량을 필요로 하며 특히 Rh식은 신선한 혈흔에 한하는 것이다.

(1) 응집소흡착시험

항혈청 ; 우선 생리적식염수로 응집기가 8배가 되도록 희석 조정한 O형 혈청(여러 사람의 것을 모은 것 또는 항 A 및 항B혈청)을 사용한다.

혈구 ; 신선한 2%의 A형 및 B형 혈구의 생리식염수 부유액

항원(흡착물) ; 검체로서는 혈흔과 혈흔 부착이 없는 부분으로부터 약 0.5 제곱센티미터의 것을 각각 두 개씩 취하여 사용한다.

흡착법
검체 및 대조편을 각각 소시험관에 취하고, 각각에 항-A, 항-B 혈청(응집소가 8배의 것)을 0.2ml씩 넣고 37°C에서 2시간, 다음으로 4°C냉장고에 하룻밤 방치하고, 각 시험관 중 혈청의 잔존응집소가를 검사한다. 이 흡착법을 hole glass위에서 단시간에 행할 수도 있다. 즉 hole glass위에서 실온에서 1시간 흡착을 행하고 즉시 판정하는 방법이다. 어는 경우에도 대조를 충분히 그리고 신중히 행하는 것이 중요하다. 결과 판정에 도움이 되기 위하여 하나의 예를 표시하기로 한다.

(2) 혼합응집반응

Mixed cell agglutination reaction . MCAR

혈흔에 항혈청을 가하면 혈흔의 혈형물질은 대응되는 항혈청과 결합된다. 과잉의 항혈청을 버리고 혈흔을 가만히 세척한 후 가하여진 항혈청에 대응되는 혈구부유액을 혈흔에 가하면 혈흔의 형물질에 결합되어 있던 항혈청과 결합하게 된다. 이것을 검경하는 경우 후에 가하여진 혈구가 혈흔에 부착된 것을 본다. 만일 혈흔 중에 대응되는 형물질이 없다면 혈흔에 혈구는 부착되지 않는다. 이 원리를 이용하여 혈흔의 혈형을 판정하게 된다.

(3) 항체해리시험 Antibody Elution Test

항원과 항체의 결합은 가온 (통상 50-56° C, 5∼10분)하면 떨어지는 성질이 있다. 따라서 혈구에 결합된 항혈청은 가온하면 해리된다. 혈흔에 항혈청을 가하고 충분히 세척한 후에 항혈청에 대응되는 혈구를 가하고 가온하여 응집반응의 유무를 검사한다. 응집되면 혈흔의 형물질과 항혈청은 대응되지 않는 것으로 해석한다.

4. 혈흔의 성별검사

(1) Barr body 검사
성혈액세포의 핵에는 Barr body가 있는데 호중구 500개를 검사하면 5∼6개의 비율로 증명된다. 따라서 혈흔을 pappenheim염색하여 Barr body의 유무를 검사한다. 혈흔에서는 3∼5일, 조건이 좋은 것은 30일 정도 지난 것에서도 증명이 가능하다.

형광소체 검사 ; 남성체세표 또는 백혈구 핵의 Y염색체에 있는 형광소체를 검출하는 것으로 염색액으로 염색하여 형광 현미경으로 감사한다. 50%이상의 세포에서 양성이면 남성, 수%이하이면 여성으로 판단한다.

(2) 성호르몬 측정
혈흔의 testosterone과 progestrone을 radioimmunoassay로 정량한다.
전자가 높고 후자가 낮으면 남성혈흔이며, 여성혈흔에서는 이와 반대이나 때로는 progestrone이 남성의 혈흔과 차가 없는 경우도 있기에 주의하여야 한다.

 

5. 혈흔의 출혈원감별

(1) 감별사항
외상에 의한 출혈인지의 여부
외상에 의한 것이라면 어느 부위의 창에 의한 것인지 여부
병적출혈이라면 토혈, 각혈, 비출혈 등의 구별
생리적인 것이라면 월경혈 또는 분만시의 출혈여부

(2) 감별방법
혈흔을 염색하여 검경하여 그 혈흔 중에 혼재되어 있는 조직세포 및 세균의 종류, 산소의 종류 등을 검사하여 감별한다.

(3) 감별점
① 외상에 의한 출혈인 경우 : 혈흔 중에 창이 형성된 부위의 장기의 조직편을 보는 수가 있다.
② 토혈 : 위점막상피세포, 음식물잔사를 보며 pH측정으로 산성을 보인다.
③ 객혈 : 폐조직편 및 점액(점조도가 높은)이 혼재
④ 비출혈 : 전모를 지닌 원주상피세포가 혼재
⑤ 분면 또는 유산시의 출혈 : 특유의 맥락막융모, 탈락막세포, 지방구, cholesterin결정 등이 혼재
⑥ 월경혈
  a) 형태학적 검사 : glycogen 함유질상피세포(Merkel 씨법)
  b) 세균학적 검사 : 질간균(증균, 분리배양)
  c) 교소학적 검사
     ⅰ) Fibrinogen치 (Berg법)
     ⅱ) Histaminase치
     ⅲ) 상조씨법 : 변성 fibrinogen이 식염수에 가용, 물에 난용인점을 이용한 방법

                         (월경혈은 혼탁, 순환혈은 투명)
     ⅳ) 혈청학적 검사
          ㉠ 항월경혈산양침감소혈청
          ㉡ 항 fibrinogen 침강소혈청
     ⅴ) 전기영동검사