유전질환 ; Southern blotting
유전질환 ; Southern blotting
작성자 닥터코리아 조회수 4787
액체 상태의 DNA를 막(membrane)에 전이 시켜놓은 DNA와 결합시키는 실험방법이다.
말초 혈액 내 백혈구나 태아 세포에서 유전체 DNA를 추출하는 것에서 시작된다.
고분자량의 유전체 DNA는 제한 효소로 완전히 처리하여 DNA를 단편화시킨다.
단편화된 DNA를 한천 겓에 전기 영동하여 분리시키고, 겔 내의 DNA를 모세관 작용에 의하여 막으로 전이(blotting)시켜서 DNA가 완전히 결합하도록 한다.
막에 결합된 DNA를 변성시키고, 방사능 혹은 다른 방법으로 표지된 단쇄 표식자를 포함하는 액체에 넣어 반응시킨다. 표식자는 막에 결합된 DNA의 일치하는 서열이고 결합하여 이중 쇄를 형성한다.
결합하지 않은 표식자를 씻어낸 후 X-선 필름에 노출시켜 표식자와 일치하는 서열을 갖는 부분을 검출한다.
Southern blotting의 민감도는 유전체의 1/1,000,000에 해당하는 DNA 절편도 검출할 수 있으며, 임상적 유용성은 개인의 유전체 DNA의 일차적 구조 중 작은 부분을 분석할 수 있다는데 있다.
실험 과정은 같지만, RNA를 대상으로 하는 경우를 northern blotting(Southern의 반대라는 의미)이라고 한다. Northern blotting에서는 특정 RNA의 유무 및 대략적인 크기를 알 수 있다.
Immunoblotting 혹은 western blotting은 단백질을 분석하는 비슷한 과정의 방법을 지칭한다. 단백질을 전기 영동하여 막으로 전이시키고, 그 막을 항체와 결합하도록 배양시킨 후 결합된 항체를 효소 혹은 방사능을 이용한 2차적 방법으로 검출하는 방법이다.
Southern blotting, Northern blotting 및 immunoblotting(Western blotting)은 모두 DNA, RNA 및 단백질을 분획화하여 검출하는 민감한 방법들이다.
